Thèse soutenue le 05 mai 2008 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I
Résumé :
À partir d’une méthode de greffage photochimique de biomolécules en capillaire développée par le laboratoire Biopuces du CEA, nous avons conçu une puce à protéines dans un format innovant pour des tests de sérodiagnostic multiparamétriques. Cette méthode de greffage permet de fixer sur la paroi interne du capillaire, de manière covalente et localisée, des antigènes protéiques qui seront ensuite mis en contact avec le sérum de patients au cours d'immuno-dosages.
La première partie de ce travail présente les différentes méthodes mises en œuvre pour la fonctionnalisation de la paroi interne des capillaires par les antigènes, avec comme objectif une méthode de greffage industrialisable pour un outil multiparamétrique de diagnostic d'infections d'origine bactérienne. Nous avons montré que seule la méthode séquentielle de fonctionnalisation des capillaires permet de répondre au cahier des charges fixé par la société AbAg.
La seconde partie présente une évaluation des performances diagnostiques des immunoessais réalisés en capillaire. Ainsi, dans un premier temps, nous avons évalué et comparé la performance individuelle de chaque antigène fixé dans un capillaire versus les performances de ces mêmes antigènes utilisés dans des tests ELISA. Les résultats préliminaires indiquent clairement que notre immuno-dosage en capillaire est au moins aussi performant qu'un test ELISA. Nous avons aussi montré que ces puces en capillaire, permettent de réaliser des tests fiables de sérodiagnostic multiparamétrique à l'aide d'antigènes protéiques performants.
Jury :
Président : Pr Emmanuel Drouet
Rapporteur : Dr Jean-Louis Viovy
Rapporteur : Dr Frédéric Laurent
Examinateur : Pr Emmanuel Drouet
Examinateur : Pr Alain Favier
Examinateur : Dr Brigitte Fouqué
Examinateur : Dr Jean-Luc Pretet
Directeur de thèse : Pr Alain Favier
Mots-clés :
Biopuces, capillaire, immunoessai, test multiparamétrique, diagnostic infectieux, photochimie, antigène, anticorps, microfluidique.